兔抗Rad21抗体亲和纯化：高纯度低背景，实验重复性强

一、产品概述由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品为兔源抗Rad21多克隆抗体货号A300-080A经抗原亲和纯化制备以未标记的完整IgG形式提供。该抗体特异性识别人类和鼠源的Rad21蛋白亦称SCC1黏连蛋白复合物亚基适用于免疫沉淀IP和蛋白质印迹WB应用是研究有丝分裂、减数分裂染色体分离及DNA损伤修复的关键工具。二、核心产品参数参数项目 | 具体规格靶标蛋白 | Rad21反应种属 | 小鼠、人宿主来源 | 兔克隆类型 | 多克隆抗体形式 | 完整IgG免疫原区域 | 第581位至C末端抗体亚型 | IgG标记类型 | 未标记纯化方式 | 抗原亲和纯化抗原种属 | 人工作浓度 | 1000 µg/ml1 mg/ml保存温度 | 2 - 8 °C有效期 | 自收货之日起1年缓冲体系 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液pH 7–8含0.09%叠氮化钠三、推荐应用与实验条件3.1 应用稀释度汇总应用技术 | 推荐用量/稀释度 | 备注免疫沉淀IP | 6 µg / mg 裂解物 | 每毫克总蛋白使用6微克抗体蛋白质印迹WB | 1:10,000 - 1:25,000 | 宽稀释范围高灵敏度建议从1:10,000起始3.2 蛋白质印迹WB专用实验条件通用条件封闭液及抗体稀释液5% 牛奶-TBST一抗孵育方式过夜孵育不可缩短细胞裂解物Western Blot推荐二抗山羊抗兔IgG重链和轻链抗体货号A120-101P免疫沉淀产物的Western Blot推荐二抗抗兔IgG轻链HRP标记抗体封闭液补充需添加5%正常猪血清货号S100-020*重要提示使用轻链特异性二抗可避免免疫沉淀实验中抗体重链约55 kDa的交叉检测干扰Rad21分子量约为75 kDa重链信号不直接影响目标位置但仍建议遵循此标准以获得最佳信噪比。四、免疫原与表位信息4.1 免疫原区域本抗体免疫原对应人Rad21蛋白第581位至C末端之间的区域。依据NP_006256.1GeneID 5885的编号体系人Rad21全长631个氨基酸因此表位映射在581–631位氨基酸之间即C末端区域。4.2 表位位置抗体识别的特异性表位位于C末端区域。Rad21蛋白是一种“kleisin”家族成员其C末端参与与SMC1/SMC3 ATPase结构域的相互作用对于黏连蛋白环的结构完整性和功能至关重要。该区域也是caspase蛋白酶切割的位点所在在凋亡信号通路中发生特异性切割。五、储存与稳定性推荐储存条件2°C至8°C冷藏切勿冷冻冷冻会导致蛋白变性及抗体活性丧失有效期自收货之日起1年缓冲液成分Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液pH 7–8含0.09%叠氮化钠作为防腐剂pH范围7–8的宽泛pH范围提供了良好的缓冲稳定性运输建议冷藏运输避免反复温度波动六、主要生物学功能1. 姐妹染色单体黏连在有丝分裂和减数分裂过程中黏连蛋白复合物环绕姐妹染色单体将其从DNA复制后到分裂后期前维持在一起确保正确的染色体分离。2. DNA双链断裂修复Rad21通过同源重组途径参与DNA双链断裂的修复。在DNA损伤时黏连蛋白被募集到断裂位点将姐妹染色单体拉近以作为修复模板。3. 凋亡信号转导Rad21已被证实可被caspase蛋白酶切割。在凋亡信号通路中caspase介导的Rad21切割触发姐妹染色单体的过早分离是凋亡程序性细胞死亡的生化标志之一。七、使用注意事项1. 叠氮化钠警示缓冲液含0.09%叠氮化钠该化合物具毒性操作时请佩戴手套和护目镜避免接触皮肤或吸入气溶胶。2. 高浓度特性本抗体浓度为1000 µg/ml1 mg/ml属于高浓度制剂。进行IP实验时按6 µg/mg裂解物用量吸取少量即可建议使用低吸附吸头以提高移液准确性。3. IP用量计算推荐用量为6 µg抗体/mg总蛋白裂解物。示例若细胞裂解物总蛋白为2 mg则需加入12 µg抗体即12 µl因浓度为1 µg/µl。4. 二抗选择检测细胞裂解物WB时可使用识别重链和轻链的二抗如A120-101P检测IP产物WB时建议使用抗兔IgG轻链HRP标记抗体并添加5%正常猪血清以降低非特异性背景。虽然Rad21分子量约75 kDa与抗体重链约55 kDa位置不同使用轻链特异性二抗仍可消除任何潜在的重链干扰并提高实验结果的专业性。5. 过夜孵育要求WB实验中一抗需过夜孵育建议4°C缓慢摇动请勿缩短至室温1–2小时否则可能显著降低检测灵敏度特别是在检测低丰度Rad21或切割片段时。6. 反应种属确认本经验证可识别人和小鼠Rad21。对于大鼠等其他物种建议通过序列比对评估交叉反应可能性并进行预实验验证。7. Caspase切割产物的检测由于本抗体识别的表位位于C末端581–631位氨基酸而caspase切割位点位于C末端区域附近因此该抗体可能无法检测被切割后释放的C末端小片段但可识别保留完整C末端的全长Rad21及N末端切割产物。设计凋亡实验时请注意此特性。*本说明书基于产品特性研究编写使用者应结合具体实验体系进行优化验证。