中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂筛选检测试剂盒：用于呼吸系统疾病、关节炎等靶向药物研发

一、弹性蛋白酶从生理功能到疾病关联弹性蛋白酶是糜蛋白酶家族中的一种丝氨酸蛋白酶其主要生理功能是降解弹性蛋白结缔组织中的关键结构蛋白以及某些病毒蛋白。在人体内弹性蛋白酶主要存在两种类型胰腺弹性蛋白酶和中性粒细胞弹性蛋白酶两者的底物特异性有所不同。中性粒细胞弹性蛋白酶又称ELA2或多形核白细胞弹性蛋白酶储存于中性粒细胞的嗜天青颗粒中。当中性粒细胞被激活时发生脱颗粒反应弹性蛋白酶等丝氨酸蛋白酶被释放到细胞外空间其主要作用是降解病原体的基质蛋白参与机体防御。然而弹性蛋白酶水平异常或其内源性抑制剂功能障碍会引发一系列疾病α-1抗胰蛋白酶缺乏症由于内源性抑制剂不足弹性蛋白酶活性失控肺气肿弹性蛋白酶过度降解肺组织弹性蛋白周期性中性粒细胞减少症腹主动脉瘤慢性阻塞性肺疾病关节炎与银屑病上述疾病关联表明弹性蛋白酶活性调控具有重要的临床意义。使用弹性蛋白酶抑制剂如Elafin以及开发副作用更少的新型抑制剂有望使弹性蛋白酶相关疾病患者获益。图1测定原理示意图。PR底物3是一种针对中性粒细胞弹性蛋白酶的荧光肽底物。在共轭形式下荧光染料AMC发出的能量被猝灭。蛋白水解作用会释放AMC并发出荧光。荧光的增强与弹性蛋白酶的活性直接成正比。二、中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂筛选检测试剂盒产品概述针对药物筛选和抑制剂 profiling 的应用需求由艾美捷代理BPS Bioscience推出的中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂筛选检测试剂盒荧光法货号82090提供了一套标准化、易于操作的解决方案。该试剂盒采用荧光检测原理能够在均相条件下实时监测弹性蛋白酶的活性变化。2.1 核心组分试剂盒包含以下关键组分纯化的人源中性粒细胞弹性蛋白酶确保酶活性的特异性和可重复性荧光标记底物底物上共价连接了荧光基团被弹性蛋白酶切割后释放荧光信号PR-02 缓冲液优化酶反应条件保证检测稳定性Sivelestat对照抑制剂作为阳性对照用于验证实验体系的可靠性2.2 规格与通量试剂盒提供两种板型选择96孔板格式可进行100次反应384孔板格式可进行400次反应高通量兼容的384孔板设计使该试剂盒特别适用于大规模化合物筛选。三、检测原理与实验流程3.1 荧光法检测原理该试剂盒采用荧光底物作为弹性蛋白酶活性的报告分子。底物分子由一段可被弹性蛋白酶特异性识别的肽段与一个荧光基团偶联而成。在未切割状态下底物可能呈现弱荧光或淬灭状态当弹性蛋白酶切割肽键后荧光基团被释放产生可定量检测的荧光信号。荧光强度与弹性蛋白酶活性呈正比。当加入待筛选的化合物时若该化合物具有抑制活性则弹性蛋白酶对底物的切割减少荧光信号相应降低。通过与Sivelestat对照抑制剂的信号比较可计算化合物的相对抑制率。3.2 推荐操作步骤1. 试剂准备将弹性蛋白酶、荧光底物、PR-02缓冲液和Sivelestat从储存条件下取出按照产品数据表进行稀释。2. 加样在96孔或384孔板中依次加入缓冲液、弹性蛋白酶溶液和待测化合物或对照抑制剂。3. 预孵育可选将酶与化合物短暂孵育使抑制剂充分结合。4. 启动反应加入荧光底物启动酶切反应。5. 孵育与检测在适宜温度下孵育指定时间后使用荧光酶标仪激发/发射波长请参考数据表读取荧光信号。6. 数据分析计算各孔的荧光强度以对照孔为基准计算抑制率绘制剂量-反应曲线并计算IC50值。四、文献参考Jakimiuk K, et al., 2021 J Enzyme Inhib Med Chem 36(1): 1016-1028.